SET UP (THIẾT LẬP) PHÒNG NUÔI CẤY MÔ THỰC VẬT

SET UP PHÒNG NUÔI CẤY MÔ THỰC VẬT

Nuôi cấy mô tế bào thực vật là các phương pháp sử dụng để duy trì, nuôi cấy tế bào, mô hoặc cơ quan của thực vật trong điều kiện vô trùng trên môi trường nuôi cấy giàu dĩnh dưỡng. 

Nuôi cấy mô thực vật mang lại nhiều lợi ích hơn so với phương pháp nhân giống truyền thống, như:

  • Tạo ra hàng loạt các cây mà không cần đến hạt hoặc quá trình thụ phấn để tạo hạt.
  • Tái sinh cây hoàn chỉnh từ các tế bào thực vật đã được biến đổi gen.
  • Tạo ra cây trưởng thành một cách nhanh chóng
  • Tạo ra chính xác số cây nhân bản giúp tạo ra các loại hoa, quả chất lượng cao hoặc có những tính trạng mong muốn khác.
  • Tạo ra các cây trong điều kiện vô trùng, để có thể vận chuyển mà hạn chế tối đa khả năng phát tán bệnh, sâu bệnh hoặc các nhân tố gây bệnh
  • Có thể tạo ra các cây từ hạt mà nếu không có nuôi cấy mô thì thường có tỷ lệ nảy mầm thấp hoặc sinh trưởng yếu, ví dụ: hoa lan hoặc cây nắp ấm.
  • Làm sạch các cây bị nhiễm virus nhất định hoặc các nhân tố lây nhiễm khác và nhân nhanh các cây này như là nguồn nguyên liệu sạch phục vụ đồng ruộng và nông nghiệp

Để set up phòng nuôi cấy mô thực vật chuẩn cần các phòng sau:

  1. Phòng rửa, sấy, hấp dụng cụ và sản xuất nước cất

Phải có hệ thống bàn thí nghiệm để máy, mặt bàn thí nghiệm là loại vật liệu chuyên dụng phenolic chống chịu hóa chất. Phần bồn rửa là loại bồn chuyên dụng bằng nhựa PP   kháng hóa chất, kích thước bồn lớn để thuận tiện cho việc rửa dụng cụ. Vòi nước chuyên dụng cho phòng lab. Có đường thoát nước.

Các thiết bị dụng cụ chủ yếu:

  1. Tủ sấy dụng cụ nhiệt độ từ nhiệt độ môi trường +5 đến khoảng  200oC (loại có thể tích lớn)
  2. Nồi hâp tiệt trùng (sử dụng để hấp môi trường và dụng cụ)
  3. Máy cất nước 1 lần và 2 lần (Loại 4l/h hoặc 8 l/h hoặc hơn tùy vào nhu cầu phòng lab)
  4. Máy sản xuất nước khử inon
  5. Máy rửa dụng cụ thủy tinh
  6. Xà phòng rửa và các loại chổi cọ rửa
  7. Giá để dụng cụ thủy tinh
  8. Giấy kiểm tra kết quả hấp
  9. Kệ để môi trường, dụng cụ
  10. Găng tay chịu nhiệt
  11. Đồng hồ đo nhiệt độ, độ ẩm phòng.

 

  1. Phòng chuẩn bị và pha môi trường

Các thiết bị và dụng cụ chủ yếu:

  1. Tủ lạnh lưu trữ hóa chất và mẫu 100-200l
  2. Tủ chứa hóa chất
  3. Cân phân tích 4 số lẻ
  4. Cân kỹ thuật 2 số lẻ
  5. Máy đo PH
  6. Máy khuấy từ gia nhiệt
  7. Tủ lạnh âm sâu -25 đến -5 oC
  8. Lò vi sóng hay bếp đun để đun nóng môi trường khi trộn với aga
  9. Nếu làm trên quy mô lớn thì cần trang bị thêm: Máy rót môi trường và Máy trộn khi pha lượng lớn môi trường.

Ngoài ra trong phòng còn có:

  • Các dụng cụ thuỷ tinh trong suốt (chai thủy tinh, đĩa petri, cốc, ống đong…)
  • Bông không thấm nước
  • Giấy báo, giấy bạc
  • Các dung dịch chuẩn (stock, solutions)
  • Màng lọc Millipore và giá đơn chịu nhiệt hoặc các phễu lọc thuỷ tinh.
  • Các hoá chất diệt khuẩn để xử lý mô thực vật: Calcium hypochlorite, Sodium hypochlorite, nước bromine, H2O2, HgCl2, kháng sinh gồm Rifampicin, các polymicin và vancomycin .

Trong phòng phải có khu vô trùng để chứa môi trường dinh dưỡng, nước khử trùng..

 

  1. Phòng cấy

Phòng cấy là một phòng nhỏ khoảng 10-15 m2, được lát gạch men và sơn loại sơn dễ lau chùi. Cửa phòng là loại của kính, phòng có hệ thống máy lạnh lọc khí và vi khuẩn. Trên tường có gắn đèn UV để tiệt trùng phòng. Tủ cấy trong phòng chỉ sử dụng nuôi cấy mô, không sử dụng để cấy vi sinh hoặc nấm mốc vì dễ bị lây nhiễm cho mẫu nuôi cấy mô.

Các thiết bị dụng cụ chủ yếu:

  1. Tủ cấy vô trùng (tên gọi khác, clean bench, laminar, tủ thổi khí sạch) dòng khí thổi đứng. Trong tủ có đèn UV để tiệt trùng và đèn huỳnh quang để thao tác.
  2. Quạt thông gió
  3. Đèn UV 1200mm
  4. Thiết bị lọc khí
  5. Giá và bàn để môi trường, dụng cụ
  6. Kệ hoặc tủ để môi trường
  7. Bộ dụng cụ cấy : kẹp, dao, giấy lọc, bình nước cất, cốc thủy tinh, ống thủy tinh
  8. Đèn cồn ( nếu có điều kiện có thể đôi sang bộ tiệt trùng que cấy bằng khí gas hoặc loại bằng điện an toàn hơn)
  9. Quần áo blue trắng
  1. Phòng nuôi

Sau khi cấy xong ở phòng cấy, mẫu được mang sang phòng nuôi để tăng sinh. Phòng nuôi có điều kiện nhiệt độ, độ ẩm, ánh sáng, độ thông khí thích hợp cho mẫu và chúng ta có thể điều khiển được. Nhiệt độ phải được phân bố đều trong toàn phòng nuôi, phải có đầy đủ ánh sáng huỳnh quang và có thể điều khiển được cường độ và thời gian chiếu sáng. Phòng nuôi phải được thổi khí đồng nhất và biên độ độ ẩm được điều chỉnh từ 20-98%.

  • Kệ nuôi cấy có gắn đèn huỳnh quang, độ chiếu sáng ở chỗ để bình nuôi cấy từ 2000-3000 lux.
  • Máy điều hòa nhiệt độ
  • Máy lắc  phòng thí nghiệm
  • Các thiết bị và dụng cụ nuôi cấy tế bào đơn
  • Tủ ấm.
  • Nếu nhân muốn nhân nhanh số lượng hơn thì sử dụng bộ nuôi cấy ngập chìm tạm thời Plantima. Giúp nhân nhanh số lượng con giống, con giống khí đưa ra vườn có sức đề  kháng tốt hơn nhiều so với phương pháp nuồi môi trường thạch, chất lượng con giống đông đều. Mang lại hiệu quả kinh tế cao với giá thành phải chăng, đang được nhiều trung tâm  và công ty lớn sử dụng.

Phòng nuôi sáng: tường nên sơn màu trắng. Các giá đèn được lắp đèn ống để chiếu sáng. Trong phòng cần gắn các máy móc kiểm tra chính xác nhiệt độ, độ ẩm.

Phòng nuôi tối: để nuôi mô và các xử lí đặc biệt. Phòng cần tất cả các điều kiện như phòng sáng chỉ khác là không cần lắp đèn chiếu sáng cho cây, cửa sổ cần được che kín bằng vải đen.

  1. Phòng sinh hóa

Dùng để tiến hành các phân tích chuyên sâu về sinh hóa, sinh học phân tử để thu nhận số liệu phục vụ công tác nghiên cứu và sản xuất. Tùy thuộc vào kinh phí đầu tư và mục đích thí nghiệm mà có thể trang bị thêm các thiết bị hiện đại như: kính hiển vi có kết nối máy ảnh kỹ thuật số, camera; tủ hút, tủ ấm; cân các loại; máy cắt tiêu bản; máy đo pH; máy ly tâm lạnh; máy PCR, máy realtime PCR; máy chạy sắc ký; máy đo quang phổ; tủ lạnh, tủ lạnh âm sâu;…

Phòng này tùy kinh phí và nhu cầu sử dụng. Phòng này chỉ sử dụng khi có nhu cầu nghiên cứu và giống chuyên sâu, chỉ áp dụng cho trung tâm nghiên cứu hoặc các công ty lớn có phòng nghiên cứu giống và sản phẩm. Đối với các đơn vị chỉ sản xuất cây giống, nhân nhanh cấy giống thì không nhất thiết phải có phòng này.

 

Liên hệ để được tư vấn thêm về set up phòng nuôi cấy mô thực vật

2 thoughts on “SET UP (THIẾT LẬP) PHÒNG NUÔI CẤY MÔ THỰC VẬT

Trả lời

Email của bạn sẽ không được hiển thị công khai. Các trường bắt buộc được đánh dấu *